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TUNEL法检测细胞凋亡（实验简介,实验步骤,所需试剂）
Release Time：2020-07-16一、TUNEL法检测细胞凋亡实验简介
细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化（细胞凋亡）的最常用方法。
二、TUNEL法检测细胞凋亡实验所需材料
二甲苯、乙醇、PBS、蛋白酶K、苏木素、甲基绿、甘油
三、TUNEL法检测细胞凋亡实验步骤
1.用二甲苯浸洗2次，每次5min；
2.用梯度乙醇（100、95、90、80、70％）各浸洗1次，每次3min；
3.PBS漂洗2次；
4.用蛋白酶K工作液处理组织15-30 min 在21–37°C或者加细胞通透液8min；
5.PBS漂洗2次；
6.制备TUNEL反应混合液，处理组用50μl TdT＋450μl 荧光素标记的dUTP液混匀；而阴性对照组仅加50μl 荧光素标记的dUTP液，阳性对照组先加入100μl DNase 1，反应在室温～37℃×10～30min，后面步骤同处理组。
7. 玻片干后，加50μl TUNEL反应混合液（阴性对照组仅加50μl 荧光素标记的dUTP液）于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃×60min。
8.PBS漂洗3次；
9.可以加1滴PBS在荧光显微镜下计数凋亡细胞（激发光波长为450～500nm，检测波长为515～565nm）
10.玻片干后加50μl converter-POD于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃×30min。
11.PBS漂洗3次；
12.在组织处加50～100μlDAB底物，反应15～25℃×10min；
13.PBS漂洗3次；
14.拍照后再用苏木素或甲基绿复染，几秒后立即用自来水冲洗。梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。
15.加一滴PBS或甘油在视野下，用光学显微镜进行计数并拍照。
四、TUNEL法检测细胞凋亡实验所需试剂清单
| 序号 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | PBS缓冲液 | HC2031 | ||
| 2 | 乙醇 | JT26000 | 64-17-5 | |
| 3 | 二甲苯 | JT24017 | 1330-20-7 | |
| 4 | 苏木精 | SX0217 | 517-28-2 | |
| 5 | 甘油 | JT26018 | 56-81-5 | |
| 6 | 蛋白酶K | HC1354 | ||
| 7 | 甲基绿 | HXH504513 | 82-94-0 |
